IDENTIFICACIÓN DE HONGOS FITOPATÓGENOS

IDENTIFICACIÓN DE HONGOS FITOPATÓGENOS

 Los hongos y los organismos semejantes a estos comprenden el grupo más numeroso de microorganismos fitopatógenos (ocho mil especies) y son los causantes de la mayoría de las pérdidas económicas agrícolas, debido al gran número de enfermedades que ocasionan. Se considera que todas las plantas son atacadas al menos por un hongo, y muchas son afectadas por un gran número de estos organismos.

 El hábitat de los hongos es muy amplio, puesto que se encuentran en el suelo, en el agua y en las plantas y animales. Pueden desarrollarse en condiciones climáticas muy variadas, en todo tipo de ecosistemas.

 Los organismos semejantes a los hongos pertenecen a los reinos Protozoa y Chromista, y los hongos al reino Fungi. Son microscópicos y macroscópicos, uni y pluricelulares. Presentan pared celular y carecen de clorofila.

 Están constituidos por células redondas u ovales solitarias o en plasmodios, o más frecuentemente por estructuras alargadas y ramificadas llamadas hifas, cuyo conjunto se denomina micelio. Cada hifa está conformada por una pared celular que protege a la membrana celular y al contenido protoplasmático, en donde se encuentran dispersos sus núcleos verdaderos, así como las mitocondrias, ribosomas, retículo endoplásmico y gránulos de sustancias de reserva. Si las hifas están separadas en celdas, se dice que el micelio es septado, y si el protoplasma es continuo en las hifas el micelio es cenocítico. En algunos hongos el micelio llega a formar pseudotejidos. Prosénquima y pseudoparénquima.

Entre las estructuras de reproducción asexual están los oídos, clamidosporas, esporangios y conidios, estos últimos solitario o agrupados en sinemas, esporodoquios, acérvulos o picnidios. Las esporas sexuales son las siguientes: cigosporas, oosporas, ascas-libres o en apotecios, peritecios y cleistotecios- y basidios, que nacen de forma directa de una espora de resistencia o en basidiocarpo, o dentro de basidiocarpos.

OBJETIVO

Reconocer las características morfológicas que distinguen a los hongos en preparaciones temporales y permanentes.

EQUIPO, REACTIVOS Y MATERIALES

Portaobjetos Cubreobjetos

Agua destilada  Azul de metileno

Agujas de disección Cultivos de hongos

Lugol Rojo congo

ACTIVIDADES PREVIAS

1.       Investigación bibliográfica del papel de los hongos en la agricultura.

2.       Las actividades que se llevarán a cabo en esta práctica son tres:

 PREPARACIONES TEMPORALES

1.       Elaboración de preparaciones temporales y permanentes de hongos, utilizando diferentes técnicas de tinción. Observación de las preparaciones elaboradas.

2.        Esquematización de lo observado, indicando los nombres de las estructuras. Pon una gota de agua en un portaobjetos, y agrega una masa de micelio y esporas de un cultivo de hongos.

3.       Observa al microscopio. Si hay micelio y esporas, agrega una pequeña gota del colorante para una mejor observación de las estructuras.

4.       Coloca el cubreobjetos y observa nuevamente al microscopio. Esquematiza lo observado.

PREPARACIONES PERMANENTES

1.       Pon una gota de lugol en un portaobjetos, y agrega una masa de micelio y esporas de un cultivo de hongos.

2.       Observa al microscopio.

3.       Si hay micelio y esporas, agrega una pequeña gota del colorante para una mejor observación de las estructuras.

4.       Coloca el cubreobjetos y observa de nueva cuenta al microscopio. Esquematiza lo observado.

5.       Sella tu preparación con barniz transparente y etiquétala.

ELABORACIÓN DEL REPORTE

A) Introducción: importancia de los hongos.

B) Descripción de las colonias CON ESQUEMAS A COLORES, indicando el medio de cultivo utilizado.

C) Descripción de los hongos observados en el microscopio CON ESQUEMAS A COLORES, señalando las estructuras observadas, y el nombre del género o de la especie, si se conoce. Así mismo, se debe indicar la técnica de tinción utilizada.

D) Discusión y conclusiones.

Bibliografía:

Agrios, G. N. 2005. Plant pathology. 5th ed. Elsevier academic Press. Amsterdam, Boston, Heidelberg, London, New York, Oxford, Paris, San Diego, San Francisco, Singapore, Sydney, Tokyo. 992 pp.

Barne H, H. L. end Hunter B. B. 1987. Illustrated genera of imperfect fungi. Fourth edition. MacMillan Publishing Company. 218 pp.

Bridge, P. D. 1998. Applications of PCR in mycology. CAB, International.

Cummins, G. B. and Hiratsuka, Y. 2003. Illustrated genera of rust fungi. Third Edition. APS Press 225 pp.

Trigiano, R. N., Windham, M. T. and Windham, A. S., 2004, Plant pathology, Concepts and Laboratory. CRC Press, Boca Raton, London, New York, 413 pp.

REACCIONES FEBRILES

¿Qué son y para qué sirven?

Qué son?

También llamadas antígenos febriles, son un conjunto de pruebas que sirven para diagnosticar enfermedades que causan fiebre, como brucelosis (fiebre ondulante, fiebre de Malta), fiebre tifoidea (Salmonella) y rickettsiosis (fiebre Q, fiebre manchada de las montañas rocallosas). Padecimientos a los cuales están expuestos tanto niños como adultos.

Cuando el cuerpo humano es invadido por agentes infecciosos, responde produciendo anticuerpos (tipo especial de proteínas) contra ellos, los cuales pueden ser observados en muestra de sangre del paciente y ser identificados de acuerdo a cantidad y tipo de infección.

 Las infecciones se suelen adquirir en áreas con mala higiene, como zonas después de desastre o guerras, extrema pobreza y falta de servicios de drenaje y agua potable, epidemia de piojos y garrapatas, entre otros. No obstante, la presencia de estos agentes infecciosos también se da en zonas urbanas donde se consumen alimentos preparados con poca higiene y al aire libre.

Se conocen como reacciones febriles a aquellas pruebas que se utilizan con el principal objetivo de diagnosticar determinadas enfermedades como: fiebre tifoidea, brucelosis, rickettsiosis…  Así, los médicos hacen uso de los antígenos febriles para detectar anticuerpos en el suero de los pacientes contra agentes infecciosos que hayan invadido el organismo.

Así, el valor de los anticuerpos depende en gran medida tanto del tipo como del curso de la propia enfermedad. Para que los resultados obtenidos realmente tengan valor, se deben tomar dos muestras separadas por un periodo de cuatro semanas; de este modo ambas pueden ser comparadas.

¿En qué consisten las pruebas de reacciones febriles?

·                Debido a que se trata de análisis sanguíneo, se requiere muestra de sangre del paciente, la cual se extrae pinchando alguna vena, que suele ser del brazo, con aguja anexa a un tubo de ensaye.

·                Personal profesional capacitado utilizará material nuevo y estéril para este procedimiento a fin de evitar infecciones y/o complicaciones.

·                De esta forma, una vez recolectada la muestra se envía al laboratorio para detectar la presencia de anticuerpos o "células de memoria", las cuales indican que el cuerpo ha estado en contacto previamente con diferentes tipos de bacterias, o bien que el cuerpo ha padecido ciertas enfermedades.

·                El valor del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad. Para que los resultados tengan un valor diagnóstico la cantidad de ellos debe aumentar, por lo que se deben tomar 2 muestras separadas por un periodo de 4 semanas para ser comparadas.

·                El informe del resultado de la prueba se hace tomando en consideración la dilución más alta que se observe en la reacción positiva.

Análisis de orina

   

Es la evaluación física, química y microscópica de la orina. Dicho análisis consta de varios exámenes para detectar y medir diversos compuestos que salen a través de la orina.

Forma en que se realiza el examen

Se necesita una muestra de orina. Su proveedor de atención médica le explicará cuál es el tipo de muestra que se requiere. Dos métodos comunes de recolección de orina son la recolección de orina de 24 horas y muestra limpia de orina.

La muestra se envía a un laboratorio, donde se examina en busca de lo siguiente:

COLOR Y APARIENCIA FÍSICA

Cómo se ve la orina a simple vista:

• ¿Es clara o turbia?
• ¿Pálida, amarilla oscura o de otro color?

APARIENCIA MICROSCÓPICA

La muestra de orina se examina bajo un microscopio para:

• Revisar si hay células, cristales urinarios, cilindros urinarios, moco y otras sustancias

• Identificar cualquier tipo de bacterias u otros gérmenes

APARIENCIA QUÍMICA (química urinaria)

• Se usa una tira especial (tira reactiva) para buscar diversas sustancias en la muestra de orina. La tira reactiva contiene pequeñas almohadillas de químicos que cambian de color cuando entran en contacto con las sustancias que interesa analizar.

Algunos ejemplos de exámenes de análisis de orina que se pueden llevar a cabo para buscar problemas incluyen:

• Examen de glóbulos rojos en la orina
• Examen de glucosa en la orina
• Examen de proteínas en la sangre
• Examen de pH en la orina
• Examen de cetonas en la orina
• Examen de bilirrubina en la orina
• Examen de gravedad específica en la orina.

Examen de proteína en la orina

    

Es un examen que mide la presencia de proteínas, como albúmina, en una muestra de orina.

La albúmina y proteína también se pueden medir mediante un examen de sangre.

Forma en que se realiza el examen

Después de que usted entrega la muestra de orina, esta se analiza. El proveedor de atención médica utiliza una tira reactiva hecha con una almohadilla con escala cromática. El cambio de color en la tira reactiva le indica al proveedor el nivel de proteína en su orina.

Si es necesario, su proveedor puede pedirle que recoja la orina en casa durante 24 horas. Su proveedor le dirá cómo hacerlo. Siga las instrucciones con exactitud para que los resultados sean precisos.

COMO SE REALIZA UN E.G.O.

Análisis de orina

Una simple muestra de orina puede ayudarnos, una vez analizada, a diagnosticar enfermedades autoinmunes, del riñón, sistémicas como la diabetes o infecciones urinarias. Aprende a descifrar sus resultados.

Escrito por David Saceda Corralo, Médico Interno Residente, especialista en Dermatología Medicoquirúrgica y Veneorología

Cómo se hace un análisis de orina

·         Qué es un análisis de orina y cuándo se realiza

·         Preparación para un análisis de orcionales o urinarios. Después te realizará una exploración física general, y valorará la realización de un análisis de orina. Te dará un volante con el que pide la prueba y señalará los datos que quieren que analicen en el laboratorio.

Días después de esta primera visita, o en el mismo momento, podrás recoger la muestra y llevarla al ambulatorio. Necesitarás un bote estéril que te darán en la consulta del médico o tendrás que comprar en la farmacia. Cuando vayas a recoger la muestra se recomienda tener tus partes íntimas limpias para evitar contaminación, y es mejor que no toques los bordes del bote con nada. Procura recoger la orina de la primera hora de la mañana, ya que estará más concentrada y es más útil para el análisis. El primer chorro de orina al miccionar es mejor no recogerlo porque es habitual que esté contaminado con gérmenes del tracto urinario.

Cuando termines de recoger la muestra cierra el bote con cuidado. Recuerda que para el análisis basta con poco volumen de orina, no hace falta que lo llenes al máximo. Deja el bote a temperatura ambiente, pero llévalo al ambulatorio en las horas siguientes. Si dejas el bote durante muchas horas al aire libre puede contaminarse de microbios o perder sustancias útiles para el análisis.

Cuando llegues a la consulta sólo tendrás que entregarlo y podrás irte. Los resultados pueden tardar desde horas a días y te los darán en la consulta del médico.

BIBLIO-GUÍA 9 CLASIFICACIÓN DE LOS MED. DE CULTIVO

Clasificación de los medios de cultivo  RESUELVE EL EJERCICO AL FINAL DEL DOCUMENTO.

1)      Consistencia

          -Liquida (Caldos), se utiliza AGAR para darle consistencia.

          -Semisólida (Checa si una bacteria es móvil o no.

          -Sólida

2)  Composición química

         – Quimicamente definidos: Se sane exactamente lo que contiene y las cantidades.

        – Químicamente indefinidos: No se sabe exactamente la cantidad que contiene solo el compuesto.

3)  Su uso

1. Medios no selectivos

Son aquellos que no contienen sustancias inhibidoras para el desarrollo de microorganismos, ejemplos: base de agar sangre, agar soy tripticasa

2. Medios enriquecidos

Son aquellos que contienen factores de crecimiento como vitaminas aminoácidos, oligoelementos u otros componentes

3.Medios de enriquecimiento

Son aquellos que favorecen el desarrollo de ciertas especies bacterianas, mientras que inhiben el desarrollo de microorganismos no deseados ejemplo: el caldo Selenito, caldo de Tetrationato, agua peptonadoalcalinizada.

4. Medios selectivos

Estos son utilizados para aislar grupos específicos de bacterias, es decir permite el aislamiento de bacterias, es decir permite el aislamiento de bacterias de un mismo tipo de Gram, dicha selectiva se debe a la presencia de inhibidores componente que no permite el desarrollo de ciertas bacterias y permite el crecimiento de otros y se dividen de acuerdo al grado de su selectividad.

1. Que es un medio de cultivo

2. Como se clasifican por su consistencia.

3. Menciona como se preparan los medios de cultivo ( agar sangre)

4. Menciona un tipo de bacteria que se siembre y se  reproduce en el Agar sangre

5. Que microorganismos se reproducen en el Agar Saborau.
6.- Que factores son los que debes controlar para que se conserve en buen estado los medios de cultivos.
7.-¿Que científico ideo la tincción de gram?

8.- 

Ya resuelto el cuestionario totalmente envía al asesor académico a su correo electrónico.

BIBLIO-GUIA 8 PREPARACIÓN LOS MEDIOS DE CULTIVO

¿Cómo se preparan?   MEDIOS MICROBIOLÓGICOS

1- Tomas las medidas correctas según las instrucciones de cada agar, este se vierte en agua destilada y se mezcla cerca de un mechero para homogenizar la solución y se mezcla hasta que este 100 homogénea, después de esto se deja enfriar con mucho cuidado

2- Después se tapa con un papel y se le adhiere cinta maskin tape, y se mete a un autoclave, esto es para esterilizar los medios de cultivo.

3- Ya que se esterilizo los medios de cultivo, se sacan y se ponen a enfriar ya sea con el ambiente o si quieres puede echarle agua para adelantar el proceso.

4- Teniendo ya los medios de cultivos listos y esterilizados, puedes echar los medios de cultivo en las famosas “cajas de Petri”

5- Las cajas de Petri se colocan debajo de uno o de varios mecheros, esto para evitar la contaminación de microorganismo no deseados, y terminar con la solidificación.

Los medios de cultivos son muy importantes en la microbiología, para el desarrollo de especies importantes según su patogenia y para encontrar las medicinas a las que son inmunes y las que en realidad le van a afectar, son indispensable y fáciles de preparar, con la ayuda de estos medios de cultivo y las pruebas bioquímicas se localizan muy fácil los M.O.

TINCION DE GRAM (PASOS)

• Cómo hacer una tinción de Gram

La tinción de Gram es un procedimiento rápido que se usa para buscar la presencia de bacterias en muestras de tejidos y caracterizarlas como Gram positivas o Gram negativas en base a las propiedades químicas y físicas de sus paredes celulares. La tinción de Gram casi siempre debe realizarse como el primer paso en el diagnóstico de una infección bacteriana.

La tinción de Gram se llama así por el científico danés Hans Christian Gram (1853 – 1938), quien desarrolló la técnica en 1882 y la publicó en 1884 como una técnica para distinguir entre dos tipos de bacterias con síntomas clínicos similares: las bacterias Streptococcus pneumoniae (también conocida como neumococo) y Klebsiella pneumoniae.

1.- Prepárate para el trabajo de laboratorio. Colócate guantes y amárrate el cabello si lo tienes largo para evitar contaminar la muestra de bacteria que vayas a analizar. Desinfecta un espacio de trabajo debajo de la campana extractora o en otra área bien ventilada. Antes de comenzar, revisa que el mechero Bunsen y el microscopio estén operativos.

2.-Esteriliza un portaobjetos de vidrio para microscopio. Si el portaobjetos está sucio, lávalo con agua jabonosa para eliminar la grasa y la suciedad. Desinféctalo con etanol, limpiador de vidrios o el método que recomiende tu laboratorio

3.- Coloca la muestra en el portaobjetos. Puedes usar el método de la tinción de Gram para ayudar a identificar las bacterias presentes en muestras médicas o en cultivos de bacterias en una placa de Petri. Para que la tinción de Gram sea útil, coloca una capa delgada de la muestra sobre el portaobjetos. Es recomendable una muestra que tenga menos de 24 horas, ya que las bacterias más antiguas pueden tener paredes celulares dañadas que responderán de forma menos predecible a la tinción de Gram.

• ·         Si vas a usar una muestra de tejido, coloca de 1 a 2 gotas de la muestra en el portaobjetos de vidrio. Extiéndela uniformemente sobre el portaobjetos para formar una mancha delgada usando el borde de un segundo portaobjetos de vidrio esterilizado. Deja que se seque con el aire antes de continuar.
• ·         Si vas a tomar bacterias de una placa de Petri, esteriliza un asa bacteriológica en la llama de un mechero Bunsen hasta que brille, luego deja que se enfríe. Úsala para colocar una gota de agua esterilizada sobre el portaobjetos y luego esteriliza y enfría el asa otra vez antes de transferir una pequeña muestra de bacteria al portaobjetos y revolverla suavemente en el agua.
• ·         Las bacterias en un medio de cultivo deben mezclarse en un agitador de vórtice y luego colocarse en el portaobjetos con un asa bacteriológica, como se indica anteriormente, pero sin agregar el agua adicional.

·         Si tienes una muestra en un hisopo, pásalo ligeramente por encima del portaobjetos.

 4.- Fija la muestra por calor. El calor fijará las bacterias al portaobjetos de forma que no se enjuaguen tan fácilmente durante la tinción. Pasa rápidamente el portaobjetos dos o tres veces por la llama de un mechero Bunsen o caliéntalo sobre un calentador de portaobjetos eléctrico. No lo sobrecalientes o las muestras podrían distorsionarse. Si vas a usar un mechero Bunsen, la llama debe ser un cono pequeño y azul, no uno alto y anaranjado.

Alternativamente, la muestra puede fijarse con metanol, agregando 1 o 2 gotas sobre la mancha seca, drenando el exceso de metanol y dejando que se seque con el aire. Este método minimiza el daño a las células huésped, dándoles un fondo más limpio.

5.- Posiciona el portaobjetos en una bandeja para tinción. Una bandeja para tinción es una bandeja poco profunda de metal, vidrio o plástico con una pequeña malla o soporte de alambre a lo largo de la parte superior. Coloca el portaobjetos sobre este soporte de forma que los líquidos que vayas a usar puedan drenarse sobre la bandeja.

• ·   Si no tienes una bandeja para tinción, el portaobjetos puede colocarse directamente sobre una cubeta de plástico para hielo.
• 6.-Empapa la muestra con cristal violeta. Usa una pipeta para empapar la muestra de la bacteria con varias gotas de tinte cristal violeta, a veces llamado violeta de genciana. Espera de 30 a 60 segundos. En una solución acuosa, el cristal violeta (CV) se disocia en CV+ e iones de cloruro (Cl-). Estos iones penetran a través de la pared celular y la membrana celular de células tanto Gram positivas como Gram negativas. El ion CV+ interactúa con los componentes con carga negativa de las células bacterianas para mancharlas de violeta.
  ·         Muchos laboratorios usan el cristal violeta de "Hucker", el cual agrega oxalato de amonio para evitar la precipitación.
• 7.- Enjuaga suavemente el cristal violeta. Inclina el portaobjetos y usa un matraz de lavado para rociar un pequeño chorro de agua destilada o de grifo sobre la parte superior del portaobjetos. El agua debería escurrirse sobre la superficie de la mancha pero no estar apuntada directamente a ella.
   No enjuagues excesivamente, lo cual puede quitar la tinción de las bacterias Gram positivas.

Empapa la mancha con yodo y luego enjuaga. Usa una pipeta para cubrir la mancha con yodo. Déjala reposar por lo menos por 60 segundos, luego enjuágala cuidadosamente con el mismo método.^[11] El yodo, en la forma de iones con carga negativa, interactúa con los iones CV+ para formar grandes compuestos de cristal violeta y yodo (compuestos CV-I) dentro de las capas interiores y exteriores de la célula. Esto atrapa el color del cristal violeta en la célula, en el lugar en el que la haya teñido.

Agrega un decolorante y luego enjuaga rápidamente. Para este paso crítico, se usa normalmente una mezcla de acetona y etanol en una proporción de 1:1. La realización de este paso debe calcularse cuidadosamente. Sujeta el portaobjetos en ángulo, luego agrega el decolorante hasta que nada del color violeta sea visible en la escorrentía. Esto normalmente toma menos de 10 segundos o incluso menos tiempo si el decolorante contiene una alta concentración de acetona. 

Detente inmediatamente o el decolorante retirará la tinción de cristal violeta de células tanto Gram positivas como Gram negativas y la tinción tendrá que repetirse. Enjuaga inmediatamente el exceso de decolorante usando la técnica mencionada anteriormente.

·     Puede usarse acetona pura (95%+) en su lugar. Mientras más acetona haya, el decolorante trabajará más rápido, lo que requerirá un cálculo más preciso del tiempo.

·     Si estás teniendo problemas para calcular la realización de este paso, considera agregar el decolorante gota a gota.

Empapa la mancha con un colorante secundario y luego enjuaga. Se usa un colorante secundario, normalmente safranina o fucsina, para agregar un contraste adicional entre las bacterias Gram positivas y Gram negativas, tiñendo las bacterias decoloradas (Gram negativas) de rosado o rojo.^[14][15] Deja el colora