“RECUENTO DIRECTO DE PLAQUETAS “

“RECUENTO DIRECTO DE PLAQUETAS “

1.    INTRODUCCIÓN.

El recuento de plaquetas puede hacerse  de manera directa y de manera indirecta. El método directo, a su vez, requiere  de un contador electrónico que sea capaz de hacer el recuento de las diferentes células sanguíneas (leucocitos, eritrocitos y plaquetas), ó en su defecto,  podrá hacerse mediante el método manual, en el que se empleará la cámara de Neubauer y la pipeta de Thoma. El método indirecto es muy útil cuando se tiene dudas sobre los resultados emitidos por cualquiera de los métodos directos, y/ó como modo de confirmar  éstos. Esto sucede por ejemplo, cuando la muestra no fue adecuadamente anticoagulada a la hora de ser tomada, ó cuando se tienen cifras anormalmente altas ó a normalmente bajas,

2.    PRINCIPIO Y METODOLOGÍA

En el recuento directo de las plaquetas mediante la cámara de Neubauer, se mezcla la sangre  en la pipeta de Thoma con un diluyente  que cause la hemólisis de los eritrocitos. Se llena el hemocitómetro con dicha mezcla y se recuentan las plaquetas en la cuadrícula central, de preferencia con microscopio de contraste de fases y con el objetivo de 40X.

3.    LISTA DE REQUERIMIENTOS

3.1 Reactivos

NUMERO	NOMBRE DEL REACTIVO	CONCENTRACIÓN	CANTIDAD
1	Oxalato de amonio	1%	1 ml

           3.2 Equipo de Laboratorio

1.1.1     Centrífuga

1.1.2     Agitador eléctrico

1.1.3     Microscopio de luz

3.3 Materiales de Laboratorio       

NÚMERO	DESCRIPCIÓN
2	Tubos de recogida de muestras con EDTA
1	Aguja  de Vacutainer
1	Contenedor de Vacutainer
1	Jeringa
1	Torundas de algodón con  alcohol isopropílico
1	Ligadura
1	Cámara de Neubauer
1	Pipeta de Thoma
1	Boquilla y  manguera para aspiración

4.   PROCEDIMIENTO.

4.1 Técnica

  4.1.1  Si se obtiene la muestra por punción digital, el sitio debe estar limpio y la sangre debe fluir libremente. Limpia la primera gota. Si la muestra es de sangre venosa debe obtenerse con una jeringa de plástico seca (o de vidrio siliconizado) con aguja corta, de calibre no menor  al 21.Retirar la aguja antes de poner la sangre en un tubo de plástico con EDTA. La sangre y el anticoagulante deben mezclarse  inmediata y cuidadosamente, para evitar la formación de espuma.

4.1.2     El mezclado de la sangre con anticoagulante debe realizarse suavemente y durante unos cinco minutos.

4.1.3     Con la pipeta de Thoma, aspirar sangre hasta la marca de 1.0 y se diluye hasta la marca de 101 con el oxalato de amonio ( dil.1:100).Hacer por duplicado.

4.1.4     Colocar las pipetas  en el agitador  de 10 a 15 minutos.

4.1.5     Llenar la cámara de Neubauer con el contenido de las pipetas debidamente mezclado, desechando las primeras 4-6 gotas.

4.1.6     Cubrir la cámara  con una caja de Petri de 10 a 20 min, para permitir que las plaquetas se sedimenten. Colocar un pedazo de algodón o de papel filtro mojado dentro de la caja para evitar la evaporación.

4.1.7     Empleando el microscopio de contraste de fases, contar las plaquetas en la cuadrícula central destinada a la cuenta de glóbulos rojos ( 25 cuadros  centrales )calculando la cifra de plaquetas como sigue:  

        

No. De plaquetas /μl= No de plaquetas contadas X factor de dilución( 100)  X factor de corrección de volumen ( 10)= No de plaquetas contadas X 1000.

4.1     Factores de Error en las Cuentas Celulares.

          4.2.1  Cuando se use sangre capilar se requiera una gota que fluya libremente.

4.1.2      Las muestras de sangre anticoagulada se deben mezclar  cuidadosamente invirtiendo el tubo de sangre por lo menos 20 veces. No se debe agitar el tubo pues se forma espuma que impide medir cantidades exactas. Inclinar el tubo bien mezclado a un ángulo de 45°, ó ligeramente mayor, y pipetear del borde superior del tubo siguiendo las mismas indicaciones que para sangre capilar.

4.1.3       Las pipetas deben estar limpias y secas.

4.1.4   Tomar las muestras  con la pipeta en forma rápida y precisa. Si se rebasa la línea del volumen deseado ligeramente, ajustar tocando un papel absorbente con la punta de la pipeta,

4.1.5     Limpiar  el exterior de la pipeta antes de introducirla  en la solución disolvente.

4.1.6   La cámara se llena por acción capilar, regulando  el flujo del líquido de la pipeta,  para que fluya suave rápidamente, Llenar  la cámara completamente, sin permitir que el líquido rebase los límites. Esperar de 10 a 20 minutos a que las células se asienten en el área de conteo. Proseguir con el conteo.

4.1.7     La cámara del hemocitómetro y el cubreobjetos deben estar limpios y secos  antes de usarse. Esto evita errores graves que se producen  por las huellas digitales y las superficies aceitosas.

  

ACTIVIDADES.

1.    Reportar resultados.

EL PRODUCTO DE EVIDENCIA DE ESTE EJERCICIO SERA: Desarrollar la práctica del laboratorio clínico y entregar el reporte.